液相色譜儀的安裝使用說(shuō)明
液相色譜儀作為實(shí)驗(yàn)室常用的分析儀器，正確的安裝與使用方法對(duì)于獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、延長(zhǎng)儀器使用壽命至關(guān)重要。
安裝前準(zhǔn)備
場(chǎng)地選擇：液相色譜儀應(yīng)安裝在水平、穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，臺(tái)面需能承受儀器及相關(guān)配件的重量。儀器周圍要預(yù)留足夠空間，方便操作、維護(hù)以及通風(fēng)散熱，距離墻面至少 15 - 20 厘米。同時(shí)，要避免將儀器放置在陽(yáng)光直射、高溫、高濕或有強(qiáng)磁場(chǎng)、腐蝕性氣體的環(huán)境中，理想的環(huán)境溫度為 20 - 25℃，相對(duì)濕度在 40% - 65%。
試劑準(zhǔn)備：流動(dòng)相必須使用 HPLC 級(jí)別的試劑，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，精確配制不同比例的水相和有機(jī)相混合流動(dòng)相。若流動(dòng)相含有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法溶解，避免使用振搖、超聲等方式，以防溶質(zhì)處于 “臨界膠團(tuán)濃度"，后續(xù)遇有機(jī)溶劑或溫度劇降時(shí)析出結(jié)晶，損傷儀器和色譜柱。配制好的流動(dòng)相需進(jìn)行過(guò)濾與脫氣處理。過(guò)濾可使用 0.45μm 或 0.2μm 的混合型過(guò)濾膜，以去除顆粒雜質(zhì)；脫氣方法多樣，如吹氦脫氣法，在 0.1MPa 壓力下，以約 60mL/min 流速向流動(dòng)相儲(chǔ)液容器中通入氦氣 10 - 15min，能有效排除約 80% 的氧氣，但成本較高；加熱回流法脫氣效果好，但要注意冷凝塔冷卻效率，防止溶劑丟失和混合比例變化；抽真空脫氣法可降壓至 0.05 - 0.07MPa 除去溶解氣體，但可能改變混合溶劑組成，多用于單溶劑體系；超聲波脫氣法將流動(dòng)相置于超聲波清洗器中震蕩 10 - 20min，效果相對(duì)較差；在線脫氣法使用簡(jiǎn)單、低故障且有效，建議購(gòu)買儀器時(shí)配備在線脫氣機(jī)。
儀器檢查：在安裝前，仔細(xì)檢查液相色譜儀各部件是否齊全、有無(wú)損壞，如泵、進(jìn)樣器、檢測(cè)器、柱溫箱、色譜柱等。檢查儀器的電源線、數(shù)據(jù)線、管路連接頭等是否完好無(wú)損，確保儀器在運(yùn)輸過(guò)程中未受到物理?yè)p傷。同時(shí)，確認(rèn)隨機(jī)附帶的說(shuō)明書、保修卡、配件清單等資料是否完整。
安裝步驟
硬件安裝：按照儀器說(shuō)明書，將液相色譜儀的各個(gè)部件依次安裝在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。首先安裝泵，確保泵體水平放置，固定牢固，連接好電源線和輸液管路。然后安裝進(jìn)樣器，將其與泵的輸出管路連接緊密，注意接口處的密封，防止漏液。接著安裝柱溫箱，將色譜柱正確安裝在柱溫箱內(nèi)，連接好柱前和柱后的管路，確保流動(dòng)相能順暢通過(guò)色譜柱。最后安裝檢測(cè)器，根據(jù)檢測(cè)器類型（如紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器等），連接好相應(yīng)的信號(hào)線和流動(dòng)相管路。在連接所有管路時(shí)，要注意管路的走向，避免管路扭曲、打折，確保流動(dòng)相流通順暢。
色譜柱安裝：安裝色譜柱時(shí)，先確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。擰下柱兩頭的密封堵頭，按柱管上標(biāo)明的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口連接，柱的出口與檢測(cè)器連接。連接管一般為外徑 1.57mm、內(nèi)徑 0.1 - 0.3mm 的不銹鋼管，兩頭配有空心螺釘及密封用壓環(huán)。連接時(shí)，將連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直至擰不動(dòng)，再用扳手順時(shí)針擰 1/4 - 1/2 圈。若色譜柱加壓后有漏液現(xiàn)象，用扳手再順時(shí)針擰 1/4 圈，直至不漏液。安裝過(guò)程中要注意避免碰撞色譜柱，防止柱內(nèi)填料受損。同時(shí)，確保接頭與柱頭深度匹配，若接頭比柱頭深，可能導(dǎo)致漏液；若柱頭比接頭深，則會(huì)產(chǎn)生死體積，使譜帶展寬和峰拖尾。此外，若新色譜柱內(nèi)貯存的溶劑與流動(dòng)相不匹配，特別是當(dāng)流動(dòng)相含有緩沖鹽時(shí)，需進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換。例如，正相柱通常用正己烷保存，轉(zhuǎn)換到 HILIC 模式時(shí)，需使用二氯甲烷或乙酸乙酯作為過(guò)渡溶劑。
軟件安裝與連接：對(duì)于配備有控制軟件的液相色譜儀，按照軟件安裝指南，將軟件安裝在配套的計(jì)算機(jī)上。安裝完成后，通過(guò)數(shù)據(jù)線將儀器與計(jì)算機(jī)連接，打開(kāi)儀器電源和計(jì)算機(jī)，運(yùn)行軟件，進(jìn)行儀器與軟件的通訊設(shè)置，確保兩者能夠正常通訊。在軟件中設(shè)置儀器的各項(xiàng)參數(shù)，如泵的流速、進(jìn)樣體積、檢測(cè)器波長(zhǎng)、柱溫等初始參數(shù)。
使用方法
開(kāi)機(jī)與初始化：打開(kāi)液相色譜儀的各個(gè)部件電源，如泵、檢測(cè)器、柱溫箱等，等待儀器進(jìn)行自檢和初始化。在自檢過(guò)程中，儀器會(huì)自動(dòng)檢測(cè)各部件的工作狀態(tài)，如泵的壓力、流量，檢測(cè)器的光路等。若自檢過(guò)程中出現(xiàn)故障提示，需根據(jù)提示信息排查故障，常見(jiàn)故障如泵頭漏液、管路堵塞、檢測(cè)器光源故障等。排除故障后，重新進(jìn)行自檢，直至儀器初始化完成。
流動(dòng)相平衡：在儀器初始化完成后，將配制好并經(jīng)過(guò)過(guò)濾、脫氣處理的流動(dòng)相連接到泵的輸液管路上。開(kāi)啟泵，以較低流速（如 0.2 - 0.5mL/min）沖洗系統(tǒng)，排除管路中的氣泡。待氣泡基本排除后，逐漸將流速提升至實(shí)驗(yàn)所需流速（一般內(nèi)徑 4.6mm 的色譜柱，流速可選 1mL/min；內(nèi)徑 4.0mm 柱，流速 0.8mL/min 為佳），對(duì)色譜柱和整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行平衡。平衡時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定，一般需要 30 - 60 分鐘，直至基線穩(wěn)定。若流動(dòng)相中含有表面活性劑，建議前一晚小流速過(guò)夜，第二天上班后將流速增至正常，再平衡 1 小時(shí)后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。在平衡過(guò)程中，密切關(guān)注泵的壓力變化和基線波動(dòng)情況，若壓力過(guò)高或基線波動(dòng)較大，可能存在管路堵塞、氣泡未排盡或流動(dòng)相污染等問(wèn)題，需及時(shí)排查解決。
樣品準(zhǔn)備與進(jìn)樣：將待測(cè)樣品用流動(dòng)相溶解，確保樣品溶解且濃度在儀器檢測(cè)范圍內(nèi)。若樣品中含有強(qiáng)極性或與柱填料發(fā)生不可逆吸附的雜質(zhì)，需使用預(yù)處理柱進(jìn)行去除。同時(shí)，使用 0.45μm 的過(guò)濾膜過(guò)濾樣品，去除微粒雜質(zhì)，防止堵塞進(jìn)樣器和色譜柱。對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣，用微量注射器吸取適量樣品，將注射器針頭插入進(jìn)樣閥的進(jìn)樣口，按照進(jìn)樣閥的操作說(shuō)明，切換進(jìn)樣閥至進(jìn)樣位置，將樣品注入系統(tǒng)；對(duì)于自動(dòng)進(jìn)樣器，將處理好的樣品放置在自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品盤中，在軟件中設(shè)置好進(jìn)樣序列、進(jìn)樣體積等參數(shù)，自動(dòng)進(jìn)樣器會(huì)按照設(shè)定程序依次進(jìn)樣。
運(yùn)行分析：在進(jìn)樣完成后，在軟件中設(shè)置好分析方法，包括流動(dòng)相的梯度洗脫程序（若為梯度洗脫）、柱溫、檢測(cè)器波長(zhǎng)、數(shù)據(jù)采集時(shí)間等參數(shù)。點(diǎn)擊運(yùn)行按鈕，儀器開(kāi)始按照設(shè)定的分析方法運(yùn)行，樣品在色譜柱中分離后進(jìn)入檢測(cè)器，檢測(cè)器將檢測(cè)到的信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)傳輸給計(jì)算機(jī)，軟件實(shí)時(shí)采集并記錄數(shù)據(jù)，生成色譜圖。在分析過(guò)程中，觀察儀器的運(yùn)行狀態(tài)和色譜圖的出峰情況，如保留時(shí)間、峰形、峰面積等。若出現(xiàn)異常情況，如峰形拖尾、分叉、保留時(shí)間漂移等，需分析原因并進(jìn)行調(diào)整，可能原因包括色譜柱性能下降、流動(dòng)相比例不準(zhǔn)確、樣品污染等。
數(shù)據(jù)處理與結(jié)果分析：分析結(jié)束后，軟件會(huì)自動(dòng)對(duì)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，如積分、計(jì)算峰面積、保留時(shí)間等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模瑢?duì)處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，與標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖對(duì)比，確定樣品中各組分的含量。在數(shù)據(jù)處理過(guò)程中，可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整積分參數(shù)，如斜率、峰寬等，確保積分結(jié)果準(zhǔn)確可靠。同時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄和保存，以便后續(xù)查閱和分析。
清洗與關(guān)機(jī)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需要對(duì)儀器進(jìn)行清洗。若流動(dòng)相僅為乙腈 - 水或甲醇 - 水，繼續(xù)以 1.0mL/min 的流速?zèng)_洗色譜柱 30 分鐘，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度。若流動(dòng)相含有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)，先采用純水（或含有 2% 甲醇）沖洗 A 管路（試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要沖洗該管路）30 分鐘，流速 1.0mL/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出 5 - 10℃；隨后更換成 20% 甲醇再?zèng)_洗 30 分鐘，流速 1.0mL/min，關(guān)閉柱溫箱加熱裝置。沖洗完成后，關(guān)閉泵、檢測(cè)器、柱溫箱等儀器部件的電源，關(guān)閉計(jì)算機(jī)和軟件。同時(shí)，清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將流動(dòng)相、樣品等試劑妥善保存，處理好實(shí)驗(yàn)廢棄物。
正確安裝和規(guī)范使用液相色譜儀是獲得準(zhǔn)確分析結(jié)果的基礎(chǔ)，操作人員需嚴(yán)格按照上述步驟和注意事項(xiàng)進(jìn)行操作，并定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，以確保儀器長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行 。
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